Determinación de los genes, 16S ADNr, polA, y TpN47, en la detección de Treponema pallidum subsp. pallidum para el diagnóstico de sífilis congénita / Determination of genes, 16S ADNr, polA, and TpN47, in the detection of Treponema pallidum subsp. pallidum in the diagnosis of congenital syphilis

Objetivo. Comparar el comportamiento de tres genes diana 16S ADNr, polA, y TpN47, para la detección de T. pallidum subsp. pallidum. Métodos. Se usaron técnicas moleculares como la reacción en cadena de la polimerasa en muestras de cordón umbilical. Mediante PCR convencional, PCR anidada y PCR en tiempo real se amplificaron blancos moleculares del microorganismo. Resultados. Se evidenció que con los tres genes por PCR convencional se obtienen similares resultados, pero por con PCR anidada y PCR en Tiempo Real, el gen TpN47 tiene mayor sensibilidad en comparación con los genes polA y 16S ADNr. Se concluye que el gen TpN47 se puede usar como blanco molecular para el diagnóstico oportuno de sífilis congénita por medio de PCR anidada y en tiempo real, ya que alcanzó la máxima sensibilidad y especificidad en este estudio.

Objective. To compare the behavior of the three target genes (16S rDNA, polA, and TpN47) for the detection of T. pallidum subsp. Pallidum. Methods. Molecular techniques such as polymerase chain reaction were used on samples of an umbilical cord. Molecular targets of the microorganism were amplified by means of conventional PCR, nested PCR and real-time PCR. Results. Similar results for the three genes were obtained by conventional PCR; but in the case of nested PCR and real-time PCR, the gen TpN47 exhibited higher sensitivity in comparison to the genes polA and 16S rDNA. In conclusion, the gen TpN47 can be used as a molecular target for the prompt diagnosis of congenital syphilis through nested PCR and real-time PCR due to its high sensitivity and specificity shown in this study.

Determinación del gen aac(6´)-aph(2´´) asociado con resistencia a aminoglucósidos en cepas de Staphylococcus coagulasa negativa en una unidad neonatal en Bogotá / Detection of gene aac(6´)-aph(2´´) in associated with aminoglucosides resistance in Staphylococcus coagulase-negative strains isolates from one neonatal unit in Bogota

Antecedentes. La causa más común de resistencia a antibióticos aminoglucósidos en bacterias Gram positivas, especialmente en S. epidermidis, es la enzima modificante AAC(6’)-APH(2"), capaz de acetilar y fosforilar un amplio rango de antibióticos. Objetivo. Determinar la presencia del gen aac(6’)-aph(2") en cepas de Staphylococcus coagulasa negativa aisladas en infecciones neonatales, e investigar la concordancia con las pruebas de sensibilidad in-vitro.Material y métodos. Se determinó la presencia del gen aac(6’)-aph(2") en 63 cepas de estafilococos coagulasa negativa provenientes de hemocultivos y puntas de catéter, de la Unidad de Neonatología del Instituto Materno Infantil, en Bogotá. Resultados. Staphylococcus epidermidis fue el germen más frecuente y el gen aac(6’)-aph(2") estaba presente en 55 (87,3%) cepas; de éstas, 42 (73,4%) cepas provenían de hemocultivos y 13 (23,6%) cepas de punta de catéter. La susceptibilidad a gentamicina se determinó mediante concentración inhibitoria mínima y para amikacina por difusión en disco. No se encontró asociación estadísticamente significativa entre la presencia del gen aac(6’)-aph(2") y la resistencia a gentamicina y amikacina. Conclusión. La presencia del gen aac(6’)-aph(2") de resistencia a aminoglucósidos es muy alta en cepas de Staphylococcus epidermidis. Diferencias en la expresión del gen pueden explicar parcialmente la falta de consistencia con las pruebas de susceptibilidad utilizadas en la clínica.

Background. The most common cause of resistance to aminoglucosides is the acetilation and phosphorilation of the antibiotic by the enzyme AAC(6’)APH(2"). Objetive. To determine the presence of the gene aac(6’)-aph(2") in strains of coagulase-negative Staphylococci isolated from infected neonates and to investigate the concordance with the susceptibility tests in-vitro. Materials and methods. the aac(6’)-aph(2") gene was determined in 63 coagulase-negative Staphylococci strains isolated from blood cultures and catheter tips obtained from the neonatal care unit at the Instituto Materno Infantil in Bogotá, Colombia. Results. Staphylococcus epidermidis was the most frequently identified microorganism. The aac(6’)-aph(2") gene was detected in 55 out of 63 strains (73,43%), 42 strains (87,5%) isolated from blood cultures, and 13 strains (23,6%) isolated from catheter tips. Susceptibility to gentamycin was determined by minimum inhibitory concentration, and susceptibility to amikacin by the disk diffusion antibiotic sensitivity test. There was no a significant statistical association between the presence of the gene and the microbial susceptibility to either gentamycin or amikacin. Conclusion. The presence of the aac(6’)-aph(2") gene in strains of Staphylococcus epidermidis is very high. Differences in the expression of the gene might explain some cases of inconsistency with the susceptibility tests.

Determinación de valores de referencia para la microtécnica de fagocitosis y muerte intracelular de Cándida álbicans en un grupo de población sana en Bogotá / Determination of reference values for the microtechnique of phagocytosis and intracellular death of Candida albicans in a group of healthy population in Bogota

La función de las células fagocíticas es un eficiente mecanismo de protección no específico contra agentes infecciosos y de eliminación de células muertas o seniles. Este proceso lo realizan células de la inmunidad innata como los macrófagos y los polimorfonucleares neutrófilos que son especialmente efectivos durante el inicio de infecciones por bacterias extracelulares Gram positivas y Gram negativas. Los macrófagos participan en etapas más tardías de la inflamación fagocitando bacterias y restos celulares. Las técnicas de evaluación de la capacidad fagocítica han mostrado ser muy laboriosas, requieren gran cantidad de muestra sanguínea y excesiva manipulación de las células analizadas. Por el contrario, la microtécnica de muerte intracelular de Cándida para el análisis de la función fagocítica es una técnica rápida, poco dispendiosa y que requiere de muy poca cantidad de sangre. En este trabajo se analizaron 56 muestras de personas sanas con la microtécnica de muerte intracelular de Candida albicans, para hallar valores normales del índice de fagocitosis y el porcentaje de muerte intracelular, indicadores que evalúan la capacidad fagocítica de los polimorfonucleares neutrófilos. El índice de fagocitosis fue de 2.70 +/- 0.43 (media +/ - DE) con un rango de 2.03 a 3.92 y el porcentaje de muerte Intracelular fue de 31.31 +/- 5.10 (media +/- DE) con un rango de 21 a 39. No hubo diferencias por grupos de edad, género, recuento de leucocitos o porcentaje de polimorfonucleares.